Ниятләнгән куллану
Ул Маймейпокс вирусын кеше зарарында яки лезония экссуда үрнәкләрен ачыклау өчен кулланыла, реаль вакыт PCR системаларын кулланып.
Тест принцибы
Бу продукт - флюоресцент зонага нигезләнгән Taqman® реаль вакыттагы PCR анализ системасы.Конкрет праймериз һәм зоналар Маймыл вирусы F3L генын ачыклау өчен эшләнгән.Ялган-тискәре нәтиҗәләрдән саклану өчен, кеше сакланган генга юнәлтелгән эчке контроль үрнәк җыю, үрнәк эшкәртү һәм реаль вакытта PCR процессын күзәтә.Комплект - маймыл вирусы ачыклау өчен кирәкле материалларны үз эченә алган тулы премикс лиофилизацияләнгән система: нуклеин кислотасын көчәйтү ферменты, UDG ферменты, реакция буферы, махсус праймер һәм зонд.
Компонентлар | Пакет | Ингредиент |
Маймыл вирусыЛиофилизацияләнгән премикс | 8 полоса PCR трубалары× 6 сумка | Праймерлар, зоналар, dNTP / dUTP Микс, Mg2 +, Так ДНК полимерасы, UDG ферменты |
MPV уңай контроль | 400 μL × 1 труба | Максатлы ген булган ДНК эзлеклелеге |
MPV тискәре контроль | 400 μL × 1 труба | Кеше ген сегментын үз эченә алган ДНК эзлеклелеге |
Чишелеш | 1 мл × 1 труба | Стабилизатор |
Ышаныч сертификаты | 1 кисәк | / |
1. ampleрнәкКоллекция:Specрнәкләр стериль трубаларга тупланырга тиеш
стандарт техник спецификацияләр белән.
2. Реагент әзерләү (реагент әзерләү өлкәсе)
Комплект компонентларын чыгарыгыз, аларны көтү өчен бүлмә температурасында тигезләгез.
3. Specрнәк эшкәртү (үрнәк эшкәртү өлкәсе)
3.1 Нуклеин кислотасы чыгару
Вируслы ДНК чыгару комплектларының тиешле таләпләренә һәм процедураларына туры китереп, 200μL сыеклык үрнәкләрен, нуклеин кислотасын чыгару өчен уңай контроль һәм тискәре контроль алырга киңәш ителә.
3.2 Лиофилизацияләнгән порошок эретү һәм шаблон өстәү
Monkeypox вирусы Лиофилизацияләнгән премиксны үрнәкләр саны буенча әзерләгез.Бер үрнәктә Лиофилизацияләнгән премикс порошогы булган бер PCR трубасы кирәк.Тискәре контроль һәм уңай контроль ике үрнәк итеп каралырга тиеш.
.
.
(3) Әгәр ачыклау өчен гомуми Real-time PCR коралын куллансагыз, турыдан-туры PCR трубаларын көчәйтү өлкәсенә күчерегез;ачыклау өчен BTK-8 куллансагыз, түбәндәге операцияләрне башкарырга кирәк: PCR трубасыннан 10 μЛ сыеклыкны BTK-8 реакция чип коесына күчерегез.Бер PCR трубасы чиптагы бер коега туры килә.Пипетинг эшләгәндә, торбаның 90 градус вертикаль булуына инаныгыз.Аэрозол барьер пипетка очлары кое уртасына уртача көч белән урнаштырылырга һәм беренче җиһазга җиткәч (күперләрдән саклану өчен) торбаны этәрүне туктатырга кирәк.Скважиналар тутырылганнан соң, барлык скважиналарны каплау өчен реакция чип мембранасын алыгыз һәм чип көчәйтүне ачыклау өлкәсенә күчерелә.
4. PCR көчәйтү (ачыклау өлкәсе)
4.1 PCR трубаларын / реакция чипын реакция танкына куегыз һәм һәр реакциянең исемнәрен тиешле тәртиптә куегыз.
4.2 Флюоресенцияне ачыклау көйләнмәләре: (1) Маймыл вирусы (FAM);(2) Эчке контроль (CY5).
4.3 Түбәндәге велосипед протоколын эшләгез
ABI7500 беркетмәсе, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio:
Адымнар | Температура | Вакыт | Cyикллар | |
1 | Алдан денатурация | 95 ℃ | 2 минут | 1 |
2 | Денатурация | 95 ℃ | 10 с | 45 |
Аннальинг, киңәйтү, флюоресенция алу | 60 ℃ | 30 с |
БТК-8 беркетмәсе:
Адымнар | Температура | Вакыт | Cyикллар | |
1 | Алдан денатурация | 95 ℃ | 2 минут | 1 |
2 | Денатурация | 95 ℃ | 5 с | 45 |
Аннальинг, киңәйтү, флюоресенция алу | 60 ℃ | 14 с |
5. Нәтиҗә анализы (зинһар, инструмент кулланучы кулланмасына мөрәҗәгать итегез)
Реакциядән соң нәтиҗәләр автоматик рәвештә сакланачак.Анализ ясау өчен "Анализ" төймәсенә басыгыз, һәм инструмент нәтиҗә баганасында һәр үрнәкнең Ct кыйммәтләрен автоматик рәвештә аңлатыр.Тискәре һәм уңай контроль нәтиҗәләре түбәндәге "6. Сыйфат контроле" белән туры килергә тиеш.
6. Сыйфат белән идарә итү
6.1 Тискәре контроль: FAM каналында Ct яки Ct> 40 юк, CY5 каналында Ct≤40 нормаль көчәйтү сызыгы белән.
6.2 Позитив контроль: нормаль көчәйтү сызыгы белән FAM каналында Ct≤35, нормаль көчәйтү сызыгы белән CY5 каналында Ct≤40.
6.3 aboveгарыдагы барлык критерийлар үтәлсә, нәтиҗә дөрес.Otherwiseгыйсә, нәтиҗә дөрес түгел.
Нәтиҗәне аңлату
Түбәндәге нәтиҗәләр мөмкин:
FAM каналының Ct бәясе | CY5 каналының Ct бәясе | Тәрҗемә итү | |
1# | Ct яки Ct> 40 юк | ≤40 | Маймыл вирусы тискәре |
2# | ≤40 | Теләсә нинди нәтиҗәләр | Маймыл вирусы позитив |
3# | 40 ~ 45 | ≤40 | Кабат тест;ул әле 40 ~ 45 булса, 1 # итеп хәбәр итегез. |
4# | Ct яки Ct> 40 юк | Ct яки Ct> 40 юк | Ярак |
ТАМГА: Әгәр дөрес булмаган нәтиҗә килеп чыкса, үрнәкне җыеп яңадан сынап карарга кирәк.
Продукциянең исеме | Мәче..К | Размер | Specрнәкләр | Саклау вакыты | Транс.& Сто.Темп. |
Маймыл вирусы реаль вакыт PCR комплекты | B001P-01 | 48 тест / комплект | Серум / Лезион Эксудаты | 12 ай | -25 ~ -15 ℃ |